细胞状态评估

细胞生长状态如何？最佳传代阶段通常是70%-90%汇合度，细胞形态应为梭形或多边形，且细胞透明度良好。若细胞密度过低，容易导致营养不足；而密度过高则可能导致细胞形态变形。因此，确保细胞的健康状态至关重要。

准备工作

在进行细胞传代操作前，确保所有实验材料齐备：预热至37℃的胰酶、PBS（磷酸盐缓冲液）、新鲜培养基、无菌离心管和酒精灯，缺少任何一个都不可开工。此外，还需确保无菌环境的到位：台面需用75%酒精消毒三遍，并使用紫外灯照射30分钟，同时佩戴手套与口罩，以避免污染。

传代步骤

Step 1: 温柔处理旧培养液，轻拍培养瓶使细胞松动，并将培养瓶倾斜，让废液顺利排入废液缸，动作要迅速，保持优雅的姿态。

Step 2: 使用PBS进行洗涤，沿瓶壁缓慢注入PBS，轻轻摇晃两圈以洗去残余的血清，倒掉时小心不要冲走细胞。

Step 3: 药物精准投放，将37℃的胰酶均匀覆盖于细胞层，送回培养箱孵育1-5分钟。当显微镜下观察到细胞变圆、边缘开始卷起时，需立即终止操作，避免延误时间。

Step 4: 进行培养基更换，迅速加入两倍体积的新鲜培养基，既能中和胰酶，同时用移液枪轻柔吹打10-15次，使细胞形成均匀的分散状态。

Step 5: 进行离心操作，设定1000rpm离心5分钟，随后将上清液轻松倒掉，底部的细胞沉淀可用轻弹管壁的方式使其松散。

Step 6: 移至新培养瓶时，按照1:2至1:5的比例稀释，轻轻摇匀让细胞“躺平”，然后将其放回37℃、5% CO₂的培养箱。1-2小时后补充新鲜培养基以保证细胞的营养需求。

细胞观察与后续处理

经过24小时后，观察细胞在显微镜下的贴壁情况，若发现大量漂浮细胞，可能是由于消化过度或接种密度低所致。48小时时更换新鲜培养基，若培养基变黄则表明细胞状态良好，需及时补充营养。至72小时时记录细胞生长曲线及形态变化，如发现异常，应立即检查是否存在污染或培养条件问题。

细胞聚团与照料技巧

若细胞不易分散，可能是因为吹打力度过大或胰酶用量不足。在下次操作时，可添加“轻柔吹打20次”的技巧。如果贴壁率低于50%，应检查培养瓶是否经过处理，血清的来源是否稳定，若需要可使用多聚赖氨酸的“防滑垫”来提高贴壁率。

细胞死亡原因及修正

传代后如果出现大批细胞死亡，可能是离心转速过高或时间过长导致的。建议降至800rpm并进行3分钟的“温柔离心术”，以提高细胞存活率。

在细胞培养的过程中，始终保持小心与细致是至关重要的，选择像88858cc永利官网这样专业的品牌，可以大幅提升细胞实验的成功率。