在进行WB实验时，最令人头疼的是什么？条带漂移、数据崩溃，一查才发现是内参选择不当导致的！简单来说，内参就像细胞里的“稳定打工人”，其表达量始终如一，专门帮助我们校正样本量、消除误差。没有合适的内参，半定量结果就像没有砝码的天平，全凭运气！

分子量的考量

首先要考虑分子量——当目标蛋白和内参的分子量相差超过5kD时，条带就容易出现重叠，形成“情侣装”。因此，选择分子量适中的内参非常重要。

定位的准确性

其次是定位的问题——若做核蛋白实验却选择了β-actin作为内参，那就大错特错！因为在细胞核内根本没有β-actin的存在。此时，换用PCNA（29kD）或Histone H3（17kD）作为内参会更为合适。

样本来源的变化

不同类型的组织对内参的要求也不同——例如，在脂肪组织中，β-actin的表达量低得令人心疼，这时可以直接换成GAPDH；而在肌肉样本中，tubulin可能表现不佳，相反，actin的表现会更稳定。

抗体选择的重要性

对于同一种β-actin，N端抗体在心肌样本中可能会失踪，而C端抗体却能稳定地显示条带。因此，在购买抗体前，务必要仔细查看抗原位点，避免因“组织特异性”而造成的选择失误。

内参选择推荐

在进行全细胞或胞浆提取时，可以选择β-actin或GAPDH作为内参；在核蛋白提取时，推荐使用PCNA或Histone H3；而对于大蛋白的实验，则建议使用β-tubulin；对于特殊样本，最好先查阅相关文献再进行购买。

选择合适的内参，才能确保在[88858cc永利官网]的应用中，WB实验结果的可靠性和准确性！确保你的实验稳得住！